Marco Bezzecchi menjadi pembalap tercepat dalam sesi latihan bebas kedua di Misano, dengan menggunakan ban belakang lunak baru dan mencatatkan waktu 1:30,624. Ia berhasil menyalip Franco Morbidelli dan Luca Marini, yang juga merupakan anggota VR46 Riders Academy. Pedro Acosta finis di urutan keempat, di depan Marc Marquez dan Alex Marquez. Sedangkan Fabio Quartararo berhasil mengalahkan trio Ducati yang masuk dalam 10 besar.
Di sisi lain, Joan Mir mengalami kecelakaan parah pada hari Jumat dan mengalami benturan keras pada lehernya. Hal ini membuatnya merasa nyeri dan tidak mampu mengendarai motornya secara normal. Meskipun tidak mengalami cedera, Mir memutuskan untuk beristirahat dan melewatkan sesi kualifikasi langsung (Q2) dan balapan sprint. Pembalap Honda Racing tersebut akan mencoba pulih untuk bersaing dalam balapan pada Minggu, dimulai dari urutan ke-12 di grid. Mir sebelumnya absen dalam balapan di Misano tahun lalu karena sakit gastroenteritis.
Dalam sesi latihan, terjadi kecelakaan cepat melibatkan Jorge Martín dan Jack Miller. Martín mengalami kecelakaan di Tikungan 1 namun tidak mengalami konsekuensi serius, sementara Miller terpaksa menyelam ke dalam run-off untuk menghindari tabrakan dengan dinding. Meskipun demikian, kedua pembalap bisa melanjutkan latihan dengan selamat.
